大鼠腦成纖維細(xì)胞提取物說(shuō)明書(shū)

大鼠腦成纖維細(xì)胞提取物【Rat Brain: Normal Brain Fibroblasts Derivatives】
  大鼠腦成纖維細(xì)胞提取物說(shuō)明書(shū)大鼠腦成纖維細(xì)胞提取物是從大鼠原代腦成纖維細(xì)胞提取的，大鼠原代腦成纖維細(xì)胞從正常大鼠腦組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。        cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA*鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及0mg總RNA。68℃反應(yīng)0min 后終止RT反應(yīng)。利用x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA， μl cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。        蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 50mM NaCl, mM EDTA, mM EGTA, % NP-40 , mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人血管組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, % SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。        潛在的應(yīng)用： <>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測(cè)序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測(cè)與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜

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注意事項(xiàng)：
. 接收到大鼠腦成纖維細(xì)胞提取物說(shuō)明書(shū)，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞00X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的）。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA-.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

培養(yǎng)步驟：
大鼠腦成纖維細(xì)胞提取物說(shuō)明書(shū)對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按：2到：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。?

兔抗GSK3A (Phospho-Ser2)多克隆抗體 英文名：Anti-GSK3A (Phospho-Ser2) rabbit polyclonal

兔抗MAP2K2 (Phospho-Thr394)多克隆抗體 英文名：Anti-MAP2K2 (Phospho-Thr394) rabbit polyclonal

兔抗RELA (Phospho-Thr254) 多克隆抗體 英文名：Anti-RELA (Phospho-Thr254) rabbit

兔抗RELA (Phospho-Ser276) 多克隆抗體 英文名：Anti-RELA (Phospho-Ser276) rabbit

兔抗NFKB (Phospho-Ser337)多克隆抗體 英文名：Anti-NFKB (Phospho-Ser337) rabbit polyclonal

兔抗JUN (Phospho-Ser243) 多克隆抗體 英文名：Anti-JUN (Phospho-Ser243) rabbit

兔抗ATF2 (Phospho-Ser62 or 44)多克隆抗體 英文名：Anti-ATF2 (Phospho-Ser62

兔抗ATF2 (Phospho-Thr69 or 5)多克隆抗體 英文名：Anti-ATF2 (Phospho-Thr69

兔抗ATF2 (Phospho-Thr7 or 53)多克隆抗體 英文名：Anti-ATF2 (Phospho-Thr7

兔抗ATF2 (Phospho-Ser2 or 94)多克隆抗體 英文名：Anti-ATF2 (Phospho-Ser2

兔抗MYC (Phospho-Thr58) 多克隆抗體 英文名：Anti-MYC (Phospho-Thr58) rabbit

兔抗MYC (Phospho-Ser373)多克隆抗體 英文名：Anti-MYC (Phospho-Ser373) rabbit polyclonal

大鼠腦成纖維細(xì)胞提取物說(shuō)明書(shū)Amphotericin B solubilized 可溶性 00mg  支

SOC液體培養(yǎng)基(干粉) L  瓶

3-Indolebutyric Acid 吲哚丁酸 33-32-4  250mg

Amikacin sulfate salt 硫酸 g  瓶

Columbin 古倫賓 546-97-4  20mg

pH值標(biāo)準(zhǔn)液(PH7.0) 500ml  瓶

Rutin 蘆丁 53-8-4  20mg

0×麗春紅 0ml  瓶

Liquidambaric acid 路路通酸 448-62-3  20mg

Epibetulinic acid 表白樺脂酸 38736-77-5  20mg

Trans-Zeatin 反玉米素 50mg  支